Respuesta sobre RACE

[joaroyo at samba.cnb.uam.es]

Hola, yo he usado el kit "Marathon cDNA amplification kit" de Clontech y, al
menos en mis manos, funciono perfectamente con los dos clones que probe. Parti
de RNA total y utilize un primer especifico para la sintesis del cDNA y otro
mas hacia 5' para el PCR. El PCR lo hice con mi Taq y las condiciones que 
normalmente empleo, no como pone en el protocolo que viene con el kit. Asi me
funciono perfectamente obteniendo bandas muy nitidas y nada de rastros aunque
luego, al secuenciar varios clones salieron algunos que no tenian nada que ver
con el mio. Otra gente en el laboratorio ha usado RNA poli A+ y el mismo 
primer para el cDNA y el PCR y no le ha salido mas que un rastro sin bandas
nitidas lo que yo achaco a la falta de especificidad que da el usar solo
un primer para las dos cosas. 
Espero que esto te sea de ayuda,

Joaquin Royo
Centro Nacional de Biotecnologia (CSIC)
Madrid