Respuesta sobre RACE

joaroyo at samba.cnb.uam.es joaroyo at samba.cnb.uam.es
Wed Oct 30 20:10:30 EST 1996


Hola, yo he usado el kit "Marathon cDNA amplification kit" de Clontech y, al
menos en mis manos, funciono perfectamente con los dos clones que probe. Parti
de RNA total y utilize un primer especifico para la sintesis del cDNA y otro
mas hacia 5' para el PCR. El PCR lo hice con mi Taq y las condiciones que 
normalmente empleo, no como pone en el protocolo que viene con el kit. Asi me
funciono perfectamente obteniendo bandas muy nitidas y nada de rastros aunque
luego, al secuenciar varios clones salieron algunos que no tenian nada que ver
con el mio. Otra gente en el laboratorio ha usado RNA poli A+ y el mismo 
primer para el cDNA y el PCR y no le ha salido mas que un rastro sin bandas
nitidas lo que yo achaco a la falta de especificidad que da el usar solo
un primer para las dos cosas. 
Espero que esto te sea de ayuda,

Joaquin Royo
Centro Nacional de Biotecnologia (CSIC)
Madrid




More information about the Methods mailing list