IUBio GIL .. BIOSCI/Bionet News .. Biosequences .. Software .. FTP

<!DOCTYPE HTML PUBLIC "-//W3C//DTD HTML 4.0 Transitional//EN">
<HTML><HEAD>
<META http-equiv=Content-Type content="text/html; charset=iso-8859-1">
<META content="MSHTML 5.50.4134.100" name=GENERATOR>
<STYLE></STYLE>
</HEAD>
<BODY bgColor=#ffffff>
<DIV><FONT face=Arial size=2>
<DIV><FONT face=Arial size=2>
<P>Warren Gallin wrote: <BR>
<P><EM>&gt; Hi folks, </EM><BR><EM>&gt; I am trying to do a Western blot on a 
set of cell lines and am trying </EM><BR><EM>&gt; to keep the protein 
concentration as high as possible. The problem is </EM><BR><EM>&gt; that the DNA 
released on boiling in SDS makes the sample impossible to </EM><BR><EM>&gt; 
pipette accurately. </EM><BR><EM>&gt; Aside from dilution, does anyone have a 
way to get the viscosity of </EM><BR><EM>&gt; this kind of extract down to a 
workable level? </EM></P><EM></EM></FONT></DIV>
<DIV><FONT face=Arial size=2>
<P><BR></P>Warren if you still wish to use the SDS method of extraction, why not 
add some DNase to your mixture...this always works for us. The high viscosity 
you mention is due to release of DNA on cell lysis. We always use a DNase premix 
called Benzonase from Merck...great stuff! However, we've also used DNaseI&nbsp; 
in a glycerol buffer. Just make sure to add the enzyme along with the SDS and 
you should have&nbsp; no problems! Good luck.</FONT></DIV>
<DIV><FONT face=Arial size=2>C.</FONT></DIV></FONT></DIV></BODY></HTML>

Send comments to us at archive@iubio.bio.indiana.edu