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<BODY bgColor=#ffffff>
<DIV><FONT face=Arial size=2>In response to Rene's question about transforming 
B. stearothermophilus - I had big problems</FONT></DIV>
<DIV><FONT face=Arial size=2>transforming this bug a few years ago (and in fact 
appealed for help in this newsgroup and recieved some very helpful 
replies).</FONT></DIV>
<DIV>&nbsp;</DIV>
<DIV><FONT face=Arial size=2>Anyway, I found the method that worked best was 
Issay Narumi's electroporation method (published in</FONT></DIV>
<DIV><FONT face=Arial size=2>Biotechnology Letters, around 1993, I think). There 
is great variation in efficiency of electrotransformation between 
different</FONT></DIV>
<DIV><FONT face=Arial size=2>strains of B. stearothermophilus - it worked very 
well with Dr. Narumi's strain K1041. In fact it turns out that this 
strain</FONT></DIV>
<DIV><FONT face=Arial size=2>is actually Bacillus thermodenitrificans rather 
than B. stearothermophilus - but this may or may not not be a problem for 
you.</FONT></DIV>
<DIV>&nbsp;</DIV>
<DIV><FONT face=Arial size=2>As a positive control for the transformation DNA 
you can use pUB110 DNA which you can buy from Sigma-Aldrich. This 
confers</FONT></DIV>
<DIV><FONT face=Arial size=2>Kanamycin resistance. </FONT><FONT face=Arial 
size=2>Also the methylation state of the DNA seems to be important- so be 
careful if you use any shuttle vectors that have been passged through E. 
coli.</FONT></DIV>
<DIV>&nbsp;</DIV>
<DIV><FONT face=Arial size=2>Good luck!</FONT></DIV>
<DIV>&nbsp;</DIV>
<DIV><FONT face=Arial size=2>Dave</FONT></DIV>
<DIV>&nbsp;</DIV>
<DIV>&nbsp;</DIV>
<DIV><FONT face=Arial 
size=2>============================================<BR>David J. Studholme, 
PhD.</FONT></DIV>
<DIV>&nbsp;</DIV>
<DIV><FONT face=Arial size=2>Division of Biochemistry &amp; Molecular 
Biology<BR>School of Biological Sciences<BR>University of Southampton<BR>Bassett 
Crescent East<BR>SOUTHAMPTON<BR>SO16 7PX<BR>UK</FONT></DIV>
<DIV>&nbsp;</DIV>
<DIV><FONT face=Arial size=2><A 
href="mailto:djs@soton.ac.uk">djs@soton.ac.uk</A><BR><A 
href="http://promscan.uklinux.net">http://promscan.uklinux.net</A><BR>============================================&nbsp;&nbsp; 
</FONT></DIV></BODY></HTML>

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