IUBio GIL .. BIOSCI/Bionet News .. Biosequences .. Software .. FTP

<!DOCTYPE HTML PUBLIC "-//W3C//DTD HTML 4.0 Transitional//EN">
<HTML><HEAD>
<META content="text/html; charset=iso-8859-1" http-equiv=Content-Type>
<META content="MSHTML 5.00.2314.1000" name=GENERATOR>
<STYLE></STYLE>
</HEAD>
<BODY bgColor=#ffffff>
<DIV>Hi,</DIV>
<DIV>I am trying to extract Rubisco from grapvine leaves, and I generally end up 
with none. I use standard extraction buffers (200 mM Tris.Cl pH8.0, MgCl2, EDTA, 
etc.) and I have to use up to 10% insoluble PVPP and up to 5% Triton X100 to 
actually see some rubisco in SDS-PAGE gels.&nbsp; I believe that the problem is 
that Rubisco is binding to phenols and its is being pulled down during the 
centrifugation step. Triton does help to solubilize some of this aggregates, 
however I do not get consistent results (sometimes works but most of the time it 
does not...). I believe it must have to do with plant's growing conditions (some 
leaves are more phenols than others). As anybody run into a similar problem? Any 
sugestions on how to solubilize Rubisco (in active form...) from whatever 
agregates its doing? Thanks a lot.</DIV>
<DIV>Joao&nbsp;</DIV>
<DIV>**********************************************<BR>Joćo P. Maroco<BR>Lab. 
Ecofisiologia Molecular - ITQB<BR>Av.Republica. EAN<BR>2780 
Oeiras<BR>Portugal<BR>Phone: 214469641<BR>Mobile:965447096<BR>Fax: 
214433644<BR>e-mail: <A 
href="mailto:jpmaroco@itqb.unl.pt">jpmaroco@itqb.unl.pt</A></DIV></BODY></HTML>

Send comments to us at archive@iubio.bio.indiana.edu